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Se inserto una canula ficticia rata: CG, raton: CG para mantener la guia de fibra patente. Se siguio el procedimiento anterior para la inyeccion de OHDA diabetes de la genterapi mot, a continuacion, se uso el registro extracelular in vivo para determinar la profundidad del STN, y se inserto el electrodo de estimulacion a esa profundidad y se fijo usando una capa de cemento adhesivo seguida de cemento cranioplastico.

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Se uso adhesivo tisular diabetes de la genterapi mot volver a pegar el cuero cabelludo, y el animal se mantuvo en un cojin de calentamiento hasta que se recupero de la anestesia y se administro buprenorfina para minimizar las molestias. Para la estimulacion y el registro en dos regiones distintas, se crearon pequenas craneotomias por encima de ambas regiones diana, y click here coloco una fibra o un optrode por encima de una region a traves de una craneotomia, y un electrodo plano o un optrode en la otra region a traves de una craneotomia separada vease la FIG.

El STN se identifico usando su patron de disparo altamente estereotipado y por el hecho de que esta rodeado dorso- ventralmente por regiones silenciosas. Se acoplo la fibra optica a un diodo laser de nm o nm salida de la fibra de 30 mW diabetes de la genterapi mot CrystaLaser.

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Se usaron pClamp 10 y una la tarjeta Digidata A tanto para recoger los datos como para generar pulsos de luz a traves de diabetes de la genterapi mot fibra. Para la estimulacion de la corteza motora anterior, la fibra se coloco encima de la capa 5 a menos de un milimetro de profundidad.

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Para garantizar la estabilidad de la fibra durante las diabetes de la genterapi mot en los animales en movimiento, se pego un adaptador de canula interno a la fibra optica extraida. Para insertar la fibra, se colocaron los roedores brevemente bajo isoflurano y se inserto la fibra mientras el animal se recuperaba de la anestesia.

Se ajusto el adaptador interno de la canula a presion sobre la guia de la canula y tambien se uso la mitad inferior de la parte de plastico de una canula see more para asegurarse de que el adaptador permaneciera conectado a la parte superior de la guia de la canula.

La salida del laser se controlo mediante un generador de funciones A para variar la frecuencia, el coeficiente de utilizacion diabetes de la genterapi mot la intensidad.

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Para los animales ThyChr2, la intensidad minima media usada para producir la conducta terapeutica fue de 10 mW. Se uso un conmutador optico giratorio de aluminio personalizado para liberar la torsion en la fibra diabetes de la genterapi mot por la rotacion de los animales. La conducta motora se evaluo usando las rotaciones inducidas por anfetaminas, el sesgo de la posicion de la cabeza, la escalada y la longitud de la trayectoria.

Los animales solo fueron aceptados para la investigacion experimental cuando la anfetamina indujo de manera fiable rotaciones en la direccion ipsilateral, confirmando una lesion de 6-OHDA de la sustancia negra.

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Antes y despues de cada ensayo de estimulacion, se uso un ensayo de igual duracion con la luz apagada como un control. Cada uno de estos ensayos fue de aproximadamente 3 minutos de duracion haciendo toda la secuencia de luz apagada-luz encendida-luz apagada en 9 minutos de duracion.

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Diabetes de la genterapi mot contaron las rotaciones ipsilaterales a las lesiones de 6-OHDA giro en el sentido de las agujas del reloj y se restaron las rotaciones contralaterales. En el calculo del porcentaje de cambio, se considero el cambio en el sesgo de rotacion en relacion con el periodo sin estimulacion.

Cada vez que el roedor se levanto y toco con cualquier pata la pared del cilindro se contabilizo como una escalada. La longitud de la trayectoria se midio con Viewer.

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Una vez finalizados los experimentos de comportamiento, se confirmo la colocacion de la canula mediante un corte. Para los experimentos en los que la estimulacion optica no produjo un cambio en el comportamiento de los roedores, tambien se recogieron los datos de la longitud de la trayectoria y el sesgo de la posicion de la cabeza, mientras que los roedores estaban con anfetamina.

Las mediciones de transmision de luz se realizaron con bloques diabetes de la genterapi mot tejido cerebral preparados a partir de dos ratas Fisher de g y source de inmediato.

Luego se coloco el tejido en una placa de Petri que contenia la diabetes de la genterapi mot solucion de sacarosa sobre el fotodetector de un medidor de potencia. En primer lugar, se midio la potencia a traves de la solucion.

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Cuando la fibra alcanzo la placa de Petri, se comparo la potencia medida con la medicion inicial a traves de la solucion para confirmar la potencia de salida total a traves de la fibra. Entonces se calculo la fraccion el porcentaje de transmision como la proporcion entre.

Se supuso que la salida de fibra era uniforme a traves diabetes de la genterapi mot diametro del cono.

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Las mediciones se realizaron a traves de la materia gris 5 en tres bloques de tejido cerebral para cada longitud de onda con cada bloque moviendose en sentido anterior- diabetes de la genterapi mot en el talamo y en la corteza y dorsal-ventralmente a traves del talamo. Se uso el umbral de busqueda de Clampfit para la deteccion automatica de los impulsos del registro de multiples unidades, que luego fue validado mediante inspeccion visual.

Se observaron las formas de onda de los impulsos 10 mostrados por Clampfit para comprobar la calidad de la deteccion de los impulsos. Para los rastros con poblaciones de multiples impulsos, se establecieron umbrales para capturar todos los impulsos; durante el estallido, es probable que se diabetes de la genterapi mot multiples neuronas de forma simultanea.

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Los estallidos se identificaron en Clampfit; dos impulsos cualquiera consecutivos que ocurrieron en un intervalo de menos de ms se contaron como pertenecientes al mismo estallido, y solo se incluyeron estallidos de diabetes de la genterapi mot menos 3 impulsos. Para cuantificar la actividad neuronal a 15 diferentes frecuencias, se generaron espectros para los rastros de los registros extracelulares in vivo usando una transformada ondicula despues de convertir los rastros en trenes de impulsos binarios.

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A continuacion, se convirtio el rastro en un histograma con un ancho de caja de 0,5 ms para cada uno de los periodos en entre el periodo previo a la estimulacion, la estimulacion y despues de la estimulacion con ajuste de duracion. A continuacion, se enumeran las horas de inicio y fin de cada uno de los segmentos, asi como el numero de impulsos.

Tabla 1. Los tres segmentos de cada espectro diabetes de la genterapi mot potencia se emparejaron con el tiempo. Esta diabetes de la genterapi mot muestra los segmentos de cada rastro la hora de inicio y fin en segundosasi como el numero de impulsos detectados durante cada periodo. Se sometieron entonces los histogramas de impulsos a convolucion con una ondicula para medir la amplitud de los espectros a frecuencias inferiores a Hz en el tiempo.

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A continuacion, se represento graficamente la amplitud media en el tiempo para cada frecuencia. La ondicula usada se reproduce a continuacion. Para determinar el cambio en la actividad de multiples bandas de frecuencia, se calcularon los espectros de amplitud para multiples barridos basales y de estimulacion de duracion equiparada como se ha descrito anteriormente.

Se diabetes de la genterapi mot luz de 20 Hz, con 5 ms de ancho de pulso a nm para activar el STN.

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Las inserciones de debajo muestran imagenes de mayor resolution de los lados lesionados izquierda y no lesionados derecha de la sustancia negra. C La trayectoria de la canula es visible en un corte coronal que muestra la colocation correcta de la canula por encima de la zona del STN.

En ambos A y Bel color amarillo indica la colocalizacion de los dos marcadores. B y Diabetes de la genterapi mot : Ampliation de los resultados del raton.

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D y C : Modulation de las neuronas inhibidoras durante el comportamiento. Se observo la expresion de opsina dependiente de Cre en la region del STN, pero el comportamiento se mantuvo sin cambios con la estimulacion optica.

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Diabetes de la genterapi mot unidades de mucha y poca amplitud mostraron una reduccion de la actividad durante la luz que volvio a los niveles basales normales despues de la estimulacion. El STN es inicialmente excitado, pero la actividad se reduce en el estado estacionario emergente medida por la perdida de los impulsos de mucha amplitud evidentes durante la linea basal.

Sin embargo, persiste actividad significativa de poca amplitud a lo largo de la estimulacion. Una vez mas, el STN responde inicialmente con un impulso seguido de la actividad de poca amplitud durante toda la estimulacion. Los cambios en la amplitud de las respuestas de circuitos locales pueden reflejar ya sea un numero alterado de celulas reclutadas o la excitabilidad alterada diabetes de la genterapi mot los elementos celulares reclutados.

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La actividad delta tanto en M1 como en STN se redujo. F Recuentos de los impulsos para segmentos de estimulacion basal y optica de duracion equiparada para cada tipo de experimento.

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Las barras de error son el TEM. La estimulacion puede manifestarse bien como regulacion 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 positiva por ejemplo, aumento de la actividad de disparo neuronal o regulacion negativa por ejemplo, la hiperpolarizacion neuronal o, como alternativa, la despolarizacion cronica de la actividad en la diana.

Breve descripcion de las figuras La invencion puede entenderse de manera mas completa en consideracion a la descripcion detallada de diabetes de la genterapi mot realizaciones de la invencion que figura a continuacion en relacion con las figuras adjuntas, en las que: diabetes de la genterapi mot FIG.

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Descripcion detallada La presente invention se cree que es util para facilitar diabetes de la genterapi mot aplicaciones practicas de varias estructuras biomoleculares fotosensibles, y se ha encontrado que la invencion es particularmente adecuada para su uso en las disposiciones y los metodos que se ocupan del control y de la estimulacion de la tension de la membrana celular.

Se pueden implantar perfeccionamientos moleculares por ejemplo, ChR2 de desplazamiento al azul y reduciendo diabetes de la genterapi mot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 espectro de VChRI para proporcionar una separacion adicional en el extremo azul del espectro.

Como alternativa, la 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 estimulacion optogenetica de los nucleos laterales del hipotalamo se puede usar para here el apetito y para los comportamientos de la alimentacion.

En la estabilizacion optogenetica de la parte subgenual de la circunvolucion del cingulo Cg25se puede aplicar luz 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 amarilla con un dispositivo implantado. Durante los periodos de tiempo en los que un paciente necesita contener las heces, la excitacion 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 optogenetica del esfinter anal diabetes de la genterapi mot proporcionara la retencion.

La excitacion optogenetica de 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 las celulas dentro del nucleo arqueado del hipotalamo medial que contienen productos peptidicos de proopiomelanocortina POMC y la transcripcion de la regulacion de la cocaina y la anfetamina CART se puede usar para aumentar el interes sexual en el tratamiento de los casos de trastornos del deseo sexual.

Este efecto no ceso completamente sus circuitos locales, pues oscilaciones de alta frecuencia y de baja amplitud persistieron durante la 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 estimulacion Figura 8B; FIG.

Las dendritas apicales de las neuronas de la capa V se pueden ver ascendiendo a la diabetes de la genterapi mot pial 22, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 23 derecha.

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La celula de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la celula es una celula neuronal o una celula madre. Una poblacion de celulas que comprende las celulas de una cualquiera de las reivindicaciones La poblacion de diabetes de la genterapi mot de la reivindicacion 4 check this out comprende ademas celulas que contienen una proteina ChR2 sensible a la luz de Chlamydomonas reinhardtii, opcionalmente en donde la proteina ChR2 comprende la secuencia de aminoacidos expuesta en SEQ ID NO: 2.

La poblacion de celulas de la reivindicacion 4 o la reivindicacion 5 que comprende ademas celulas que contienen una proteina NpHR sensible a la luz de Natromonas pharaonis.

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El polinucleotido de las reivindicaciones 7 u 8, en el que la secuencia de nucleotidos esta optimizada en cuanto a los codones para la expresion en una celula de mamifero.

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El diabetes de la genterapi mot de una cualquiera de las reivindicacionesen donde el polinucleotido esta en un vector de expresion. El polinucleotido de la reivindicacion 11, en el que el vector de expresion es un vector viral.

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El polinucleotido de la reivindicacion 12, en el que el vector viral es un vector lentiviral o un vector de virus adeno-asociado AAV. Un metodo de uso de las celulas de cualquiera de las reivindicaciones que comprende la activacion con luz de la proteina VChr1.

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